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Biolistic PDS-1000/He 基因枪系统将微米大小的、包被有核酸的金或鸽微粒(0.6-1.6 μm )加速到所需要的速度,从而将基因导入细胞、组织或器官。系统利用高压氨气的轰击,来推动携带有微粒的塑料大颗粒载体盘朝目标细胞方向加速。推进大颗粒载体的氨气压力由所使用的不同破裂盘决定。破裂盘是一种可在特定压力下破裂的塑料密封体。终止屏可阻止大颗粒载体,但微粒可以通过从而进入靶细胞。为了提高这一进程的效率,可抽空转化室,使压力低于大气压力,从而当微粒进入靶细胞时可减少其摩擦阻力。
1、一种可重复的、转化完整培养细胞的方法,几乎无需对细胞进行处理
2、可以避免使用传统转染方法时化学试剂对靶细胞的毒性作用
3、实验过程的**控制
4、高重复性
PDS-1000/He 基因枪系统加上Hepta 适配器后,可以比标准系统多转化7-10 倍的细胞。它配接PDS-1 000/He 系统的冲击室,将氯气冲击波分导至7 个载体盘处。这样,通过在更大面积上均一地分散DNA 包被的金粉或鸽粉,增加了这个系统一次轰击的细胞数。当氨气被分成7 道时,降低了压力和颗粒速度,该系统特别适合不太需要强大穿透力的植物和培养细胞。
轰击参数* | ||||
细胞类型 | 真空("Hg) | 目标间距(cm) | 氯气压力(psi) | 金属微粒大小 |
细菌 | 29 | 6 | 1,100 | M-5 鸽粉 |
酵母菌 | 28 | 6 | 1,300 | 0.6 μm 金粉 |
藻类 | 29 | 6 | 1,300 | 0.6 μm 金粉 |
植物 胚芽 | 28 | 6 | 1,300 | 1.0 μm 金粉 |
愈伤组织 | 28 | 9 | 1,100 | 1.0 μm 金粉 |
细胞器 | 28 | 6 | 1,300 | 0.6 μm 金粉 |
动物 | ||||
组织培养 | 15 | 3 | 1,100 | 1.6 μm 金粉 |
组织切片 | 25 | 9 | 1,100 | 1.6 μm 金粉 |