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同一系统上使用
Flash和制备HPLC色谱纯化多肽
色谱应用
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简介
固相多肽合成（SPPS）是科学研究、临床和商业合成领域中最常用的多肽合成路径。由于反应通常产生多种长度的肽链，所以这些反应混合物的提纯非常具有挑战性。使用大孔反相填料色谱柱和制备 HPLC 能够得到高纯度的结果，所以常用于此类纯化。不过，多肽反应通常很复杂，含有很多杂质。将此样品引入昂贵的制备 HPLC 柱和系统中会产生额外的消耗，而且需要较多时间进行样品纯化。Pure Prep 系统既能运行制备 HPLC 也能运行 Flash 色谱模式，令您从容选择使用制备 HPLC 还是更经济的 Flash 色谱。FlashPure 大孔 Flash 柱填装高效的 20μm 粒径的填料，分离度高，这是分离很靠近的化合物分子诸如多肽等特别需要的。在此我们证明，如何在同一系统上使用 FlashPure Flash 柱和 HPLC 柱纯化复杂的多肽反应物，并使最终纯度超过95%。
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实验材料和方法
样品 | 样品1（Flash色谱） | 样品2（制备HPLC） |
多肽混合物 | 25mg 反应混合物 | 15mg 反应混合物 |
目标多肽链长 | 20 个氨基酸 | 15 个氨基酸 |
多肽序列 | CQQYNRPYXXXGGTKLEIKR-NH2 | CAKHYYYGGXXXMDY-NH2 |
纯化 | Flash 色谱 | Prep 色谱 |
仪器系统 | Pure flash 模式 | Pure Prep 模式 |
Flash 柱芯/色谱柱 | FlashPure WP C18 12g | Vydac 150HC，22×150mm，10um |
梯度/检测器 | A=水 B=乙腈+0.1%TFA | A=水 B=乙腈+0.1%TFA |
进样模式 | 液体进样 | 液体进样 |
分析 | 分析型 HPLC |
系统 | Agilent 1200 |
色谱柱 | Kromasil C18 100×4.6mm，3um |
流动相 | A=水+0.1%TFA B=20%水，80%乙腈+0.1%TFA |
梯度 | 样品1：20分钟内10-50%B 样品2：20分钟内15-55%B |
检测波长 | UV214nm |
进样模式 | 液体进样-多种进样体积 |
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结果与讨论
纯度结果 | 纯化前纯度 | 纯化后纯度 |
样品1（Flash 色谱纯化） | 58.5% | 95% |
样品2（Prep 色谱纯化） | 55.9% | 98.9% |
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结论
通过以上实验证明：使用反相 Flash 柱和 HPLC 色谱柱，成功地在同一系统上进行了多肽纯化，得到纯度超过 95% 的馏分。高效大孔 Flash 色谱填料提供了堪比制备 HPLC 色谱柱水平的纯度，Pure Prep 系统既能够运行制备 HPLC 也能运行 Flash 色谱模式，您可以自如选择使用制备 HPLC 或更经济的一次性 Flash 色谱柱。
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