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蝉鸣声声入夏来,烈日高照,暑气炎炎,欢迎来到一年一度的人间大火炉时节——夏季。夏天,我们享受着天然免费的汗蒸和干蒸,不仅大脑热到颤抖,连DNA都要化了,离变异也不远了。
冇使惊,冰冻西瓜、冰可乐、雪糕刺客、空调……解暑降温神器纷纷登场,救我一命。勇敢的朋友还可以剃个光头过个清凉的夏天。
综上可见,生物对温度的变化是很敏感的,温度的变化影响着世间万物。从古至今,对于温度的控制和热量的利用,也在人类生活生产中扮演了至关重要的角色。在生命科学研究领域,温度是实验中非常重要的一个参数。例如,使用紫外法测定DNA熔解温度(Tm)就是一项非常经典的需要样品控温的实验。
DNA 的变性的特点是爆发式的, 变性作用发生在一个很窄的范围。通常把DNA 的双螺旋结构失去一半时的温度称为该DNA 的熔点或熔解温度( melting temperature ) , 用Tm 表示。DNA 的Tm 值一般在70~85 ℃之间。DNA的变性从开始解链到完全解链,是在一个相当小的温度范围内完成的,一系列物化性质也发生改变: 260 nm 区紫外吸收值增高(增色效应) , 粘度降低, 浮力密度降低等。所以,我们可以利用紫外可见分光光度计检测DNA样品在260nm处吸光度随温度的变化,对解链过程进行监测。
不同种类DNA的Tm值不同:G-C 的含量越高, Tm 越高(由于鸟嘌呤-胞嘧啶(G≡C)核苷酸之间有3个氢键,而腺嘌呤-胸腺嘧啶(A=T)之间有2个氢键,G≡C核苷酸解离所需能量大于A=T碱基对所需能量。), 由Tm 值可推算出GC含量。其经验公式为: ( G-C)% = ( Tm - 69.3 ) ×2.44
在以下示例实验中,使用梅特勒-托利多紫外可见分光光度计UV7配备酷T(CuveT)恒温器,测定20℃-95℃升温范围内鲑鱼精DNA在260nm处的吸光度变化,以监测其变性过程。我们用各温度点测得的吸光度绘制图谱,可得到一条温度-吸光度S形曲线,如下图所示:
图:260nm处鲑鱼精DNA的熔解曲线(案例来源梅特勒公众号)
在此实验案例中,鲑鱼精DNA的Tm值通过确定S形曲线的拐点来确定。经测定和计算,鲑鱼精DNA的Tm值为64.4℃,说明其G≡C碱基对的浓度相对较低。确定熔解温度的另外一种方法是用切线法对S形曲线的拐点进行图形化评估。
我司已为广大相信光的实验奥特曼准备好了应用秘笈和成套装备,轻松应对需要对样品进行温控的紫外实验。梅特勒-托利多超越系列紫外可见分光光度计可搭载酷T帕尔贴控温系统或劳达(LAUDA)等水浴恒温系统,实现对样品精准快速的温度控制:
梅特勒-托利多紫外可见分光光度计+酷T帕尔贴控温系统方案:
梅特勒-托利多紫外可见分光光度计+劳达(LAUDA)水浴温控系统联用方案: