AN-170蛋白聚集

概述

在蛋白质溶液中聚集已被证明有有害的影响。对于较大的聚集体，可以测量这些聚集体，但是在0.150 nm至2微米范围内的较小聚集体具有很难量化。Nicomp动态光散射(DLS)技术可以证明聚集体的存在，但不能提供任何关于聚集体绝对浓度的信息。

讨论

生物治疗药物已被证明容易诱导产生抗药物抗体(ADA)。证据表明，蛋白质聚集具有增强免疫原性的能力，因此增强了对蛋白质单体形式的免疫反应生物治疗蛋白的制造商通常通过一系列步骤准备注射用药物，例如:

1.蛋白质合成与纯化

2.在运输过程中为了稳定而进行冻干

3.注射前的复溶

虽然冻干的好处是可以稳定蛋白质以供运输，但目前还不清楚冻干蛋白质在复溶后是否会恢复到其单体状态。如果少量的蛋白质在这一过程中聚集，就有可能引起患者对治疗过程的免疫反应。

开发一种简单的方法来测定复溶后大小与浓度的直方图形式的聚集程度，将能够在配制过程中筛选这些药物，以确保在复溶后导致单体释放而不会产生大量的聚合。

在图1中，显示了种群在200nm处的疫苗的分析。 在约300nm处清晰可见聚集。

这三次测试清楚地表明，样品在200nm处的损耗伴随着在300nm处的峰值的增加。

图1:疫苗在300nm处产生聚合

从图2可以看出，在大约600nm处也可见聚集现象。需要注意的是，样品在200nm处的浓度是600nm处聚合体浓度的10万倍。

图2: 疫苗在600nm处产生了聚合

图3显示了更准确的浓度测量结果，可以通过更改显示比例来进行。从该图可以看出，疫苗2在600nm处的聚集体浓度是疫苗1的5倍。

图3:疫苗1 VS 疫苗2

有了这些信息，就有可能确定这种疫苗制备的最佳配方条件，以避免聚集和减少对治疗产生不必要的免疫反应的风险。

最后的图表显示了另一组分析，表明一些蛋白质即使在5μm处也会表现出较低的聚集水平，而实际浓度可能相对于天然蛋白很低，从而避免被其他方法检测到。

图4:在5μm处还有少量的聚合

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