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SFC 分离木犀草素
SFC应用
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简介
紫苏（Perilla frutescens）是一种草本植物，其叶和种子中含有多种生物活性成分，包括木犀草素（Luteolin），这是一种具有多种药理作用的黄酮类化合物。木犀草素具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等生物活性。
▲ Luteolin
采用传统的 Prep HPLC 方式虽然可以将木犀草素从紫苏提取物中进行分离，但是制备时间较长且流动相损耗量较高，无论从时效性还是经济效益角度出发，都不是最佳的选择。
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常规制备色谱洗脱条件
C18, 10x250mm, 15um
梯度洗脱, 水/乙醇 +1% 甲酸
进样量：0.5mL
流速：15mL/min
▲ 木犀草素色谱峰在 36min 之后
除了洗脱时间较长之外，由于流动相中水的存在，也给后续木犀草素样品的浓缩带来一定的麻烦。（即使步琦的旋转蒸发仪能够解决这一问题）。
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采用 SFC 样品纯化
那么是否可以采用超临界流体色谱（SFC）的方式进行样品的纯化呢？
首先我们采用 Sepmatix SFC 8X 平行液相色谱快速筛选适合于木犀草素分离的色谱柱。
实验条件：
流速：3mL/min
运行时间：15min
梯度洗脱 10-60% 甲醇
▲ 紫苏提取物在 PEI 色谱柱上具有更好的分离效果
之后采用 Prep SFC-50 对样品进行大量分离与制备。
实验条件：
PEI, 10x250mm, 5um
梯度洗脱 20-40% 甲醇 5min
进样量：0.3mL
流速：20mL/min
▲ 木犀草素色谱峰在 2min 之后
两种不同分离方式对比：
萃取条件 | Prep HPLC | Prep SFC |
木犀草素色谱峰 | 36min 之后 | 2min 之后 |
总运行时长 | 42 min + 15 min平衡 | 8 min + 1 min 平衡 |
总溶剂使用 | 390ml ethanol + 240ml water | 50 ml methanol |
4
实验结论
通过对比发现，SFC 在分离木犀草素的过程中，无论从时效性还是溶剂消耗量上都优势明显。
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