三种模式应用于聚合物分离   

通常来讲，对于聚合物的分离，主要方法为体积排阻色谱（SEC）和液体吸附色谱（LAC），然而在这两个模式之间，存在着所谓的临界条件下液相吸附色谱法(LACCC)。原理上，对于所有的模式都是根据分子的特性来对聚合物进行分离。

其实，在这三种模式中使用超临界 CO2 只是停留在早期的研究中，但是随着 SFC 领域的快速发展，又燃起了我们对于这些模式研究的希望！本篇文章，我们将会以聚乙二醇（PEG）为模型展示这三种模式下的分离状态。为了确定临界条件下的色谱参数，采用了质量源于设计（QbD）的方法来减少所需的实验。

表1. 超临界流体色谱法对聚合物不同分离方式的比较。哪种模式占主导地位取决于色谱条件，主要是溶剂强度。

QbD 法确定关键色谱条件：

在第一次筛选后，使用 QbD 方法以最少的实验确定关键色谱条件

在较小的条件区域内，所有共洗脱的聚乙二醇都可以得到，图中用白色背景表示

这一点通过实验得到了验证

PEG-400 与聚多卡醇(端基为 C12-烷基的 PEG-400)在如下条件分离：

图1.由 Fusion QbD 软件生成的方法设计；

在临界色谱条件 T 中进行

图2.在临界色谱条件：36% 甲醇和 56℃ 下，不同 PEG 的共洗脱(上图)和 PEG-400 与聚多卡醇的分离(下图)

图3.scSEC：等度模式；10/90（CO2/甲醇）

 图4.SFAC：梯度模式；

十分钟之内 90/10 – 50/50（CO2/甲醇）

图5.SFAC：等度模式；90/10（CO2/甲醇）

scSEC色谱法在亚临界条件下通过高比例的强溶剂进行等度洗脱，高分子量的 PEG 更早的洗脱出来。

SFAC色谱法通过梯度洗脱模式对 20kDa – 200Da 分子量范围内的 PEG 进行洗脱。后续采用低比例改性剂的等度模式对可将 PEG-200 和 PEG-400 分散剂分解为其单分散组分。分子量的确认通过 SFC-MS 联用技术进行确认。

SEC校准：将衍生化均匀聚合物与常规 PEGs 分散剂进行校准比较，以此来证明均匀聚合物的可用性。