一、样品前处理

1、              所用试剂

必须使用重蒸馏水或与之等质的水（电导率＜10μs）

1、1            双氧水,30%

1、2            甲酸，98-100%

1、3            苯酚：须重蒸

1、4            偏重亚硫酸钠

1、5            氢氧化钠

1、6            盐酸，ρ＝1.18g/ml

1、7            水解剂：6mol/l 的HCL，1L含1g苯酚：

加1g苯酚（3.3）到492mL盐酸(3.7)中，然后用水定容至1L

1、8            20种氨基酸标准品

2、              标样配置

   氨基酸混合标准储备液：称取上述各氨基酸标样使用PH2.2的Load Buffer配置成2.5umol/L的储备液备用。

  取氨基酸混合标准储备液与PH2.2的Load Buffer以1:9的比例配置成0.25umol/L的标准液。

3、              前处理设备

1)        天平

2)        水解管

3)        量筒

4)        无油真空泵

5)        干浴水解、浓缩仪

6)        移液管

7)        0.45um滤膜

4、                 样品制备（参考欧盟饲料指令98/64/EC ）

1、              样品的准备

粉碎样品，通过0.5mm的筛孔。高水分的样品粉碎前必须低于50℃鼓风干燥或者冷冻干燥。高脂肪含量的样品粉碎前必须用轻质石油（3.12）脱脂。

2、              氧化

从准备好的样品中称取约0.1~1克样品，准确到0.2mg，于100 ml带螺纹盖子的瓶子中，称取的样品应该含有大约10mg氮，水分不能超过100mg。将瓶子放于冰水浴中冷却至0℃，加5ml氧化试剂（过甲酸苯酚），用带弯头的玻璃刮勺混合。用空气密封膜将瓶子和刮勺一起密封，密封后一起放入0℃冰箱的冰水浴中，放置16小时。之后，从冰箱中取出，加0.84克偏重亚硫酸钠（3.4）来分解过量的氧化试剂。

3、              水解

 加入25毫升盐酸-苯酚溶液, 然后将反应瓶放在烘箱中，温度控制在110摄氏度，旋松帽子（防止玻璃瓶子破裂），水解1小时。然后快速旋紧瓶塞（戴手套和护眼罩）将其继续在烘箱110摄氏度下水解23小时。

4、              加入内标并且调节pH值到2.20

    当水解反应结束后，将反应瓶从烘箱中取出，并且打开瓶口（戴手套和护目镜）。冷却后用定量加样器准确加入15.00克(15毫升)正亮氨酸标准溶液，混合并且转移水解溶液到250毫升的塑料烧杯中。加入大约125毫升柠檬酸缓冲液和19毫升氢氧化钠水溶液,将实验烧杯放入到样品容器中用氢氧化钠水溶液将溶液调节到pH为正好2.20。

转移一部分溶液（不需要全部）到50毫升有盖子的塑料瓶中。可以马上测定或者放入冰箱等到分析的时候测定。

二、分析方法描述（Biochrom 30+）

氨基酸分析仪分析方法参数：

1)        色谱柱：Biochrom Na型阳离子交换树脂柱，4.6´20cm

2)        分离程序：

3)        运行时间：分析时间65min

4)        反应单元温度：135°C。

5)        检测波长：570nm、440nm同时检测。

三、外标法定量

附、鱼粉A分析图谱